原代心肌細胞間的培養是為了什么？

　　原代心肌細胞間作為主要研究模型廣泛應用于心血管研究，經(jīng)過(guò)長(cháng)期的嘗試，我們實(shí)驗室找到了一些行之有效的方法，積累了一些經(jīng)驗?？偨Y如下：

　　1、細胞分散和接種均勻度

　　分離出來(lái)的心肌細胞在溶液中Ca2+的作用下容易結塊，因此，在差動(dòng)貼壁前后，應將心肌細胞輕輕吹吹多次，形成單一分散狀態(tài)。接種后，心肌細胞應均勻分布在培養板上避免細胞聚集到培養孔中心另外，將培養板放入培養箱后，用滴管輕輕吹每個(gè)孔中心部分2~3次，但要特別注意避免污染。

 

　　2、成纖維細胞的抑制和血清類(lèi)型的選擇

　　成纖維細胞比原代心肌細胞間更容易貼壁，具有分裂和增殖的能力。差異粘附后，少量成纖維細胞仍混合在心肌細胞中。如果處理不當，它們很容易長(cháng)成優(yōu)勢細胞溴脫氧尿苷（BrdU）會(huì )干擾細胞有絲分裂，因此BrdU通常用于抑制成纖維細胞的生長(cháng)，但如果使用胎牛血清培養細胞，則很難BrdU*抑制成纖維細胞的生長(cháng)，因為胎牛血清中含有許多促有絲分裂因子，使用小牛血清可以克服這種現象，獲得90%以上的心肌細胞。

　　3、換液時(shí)間

　　觀(guān)察原代心肌細胞間形態(tài)時(shí)，接種密度低，貼壁心肌細胞數減少。為避免因更換溶液而丟棄有活力的心肌細胞，接種后48小時(shí)應更換溶液，這樣不僅貼壁心肌細胞數量明顯增加，而且BrdU的作用時(shí)間更長(cháng)，對成纖維細胞的抑制作用更明確此外，其與0.1g?L1BSA對心肌細胞黏附率和凋亡率無(wú)顯著(zhù)影響。

　　4、防污染措施

　　除無(wú)菌操作等常規技術(shù)方法外，還應特別注意以下幾點(diǎn)：（1）取心時(shí)避免切開(kāi)消化道較安全的方法是切入劍突上肋，不涉及腹腔，減少污染機會(huì )（2）條件允許的情況下，新生大鼠心肌細胞不應與其他細胞在同一培養箱中共培養，以防止交叉污染（3）培養的心肌細胞的觀(guān)察和拍照每次時(shí)間過(guò)長(cháng)，否則不僅會(huì )改變培養基的pH值，還會(huì )增加污染的概率。